Kód: NED0010
Kétszálú DNS izolálása mintákból
|
Kiszerelés
NED0010L 42 mintához
ALKALMAZÁS
A DiaExtract Total DNA Isolation kit a laboratóriumi gyakorlatban a vizsgálati minták DNS tartalmának kivonására szolgáló reagens készlet. Az izolálás során kinyert kétszálú kromoszomális DNS mennyiségben és minõségben (tisztaság) meg kell feleljen a molekuláris azonosító eljárások (pl. PCR) igényeinek. E mennyiségi és minõségi igényeknek megfelelõen a DiaExtract Total DNA Isolation kit optimális reagens készlet a kétszálú DNS gyors és megbízható izolálására a különbözõ eredetû szilárd vagy folyadékmintákból. Az eredményként kapott DNS mennyiségében és minõségében egyaránt megfelelõ kiindulópont további molekuláris azonosító eljárásoknak.
AZ ALKALMAZÁS ELVE
A DiaExtract Total DNA Isolation kit a kétszálú kromoszóma DNS gyors izolálására alkalmas rendszer. A reagens készlet a különbözõ eredetû minták mikrobiális szennyezõdésének, azaz a baktériumok, egysejtû gombák feltárásában és hagyományos lizozim-enzimatikus, vagy mechanikus (roncsoló-homogenizáló készülékkel történõ) lízisénél egyaránt alkalmazható. A homogenizáló készülékek elõnye, hogy a teljes mintán egységesen érvényesül a roncsoló-homogenizáló hatás, így a fizikai szétesés gyorsan, hatékonyan és jól ismételhetõen történik, míg az enzimatikus bontás kevésbé gyors és fokozatosan halad elõre. Igény esetén a két eljárás kombinálható egyazon csõ alkalmazásával. Homogenizáláshoz a mintát üvegforgácsot és acélgolyókat tartalmazó 2.0 ml roncsoló csövekbe helyezzük (Destruction tubes), majd a homogenizálás maga Lysis buffer jelenlétében zajlik. Amennyiben a laboratórium nem rendelkezik asztali roncsoló-homogenizáló készülékkel, a vizsgálati mintákat hagyományos módon kezeljük. Ez utóbbi esetben a feltárás hatékonyságának biztosítására a Lysis Buffer-t lysosyme enzimmel kiegészítjük. A feltáró lízis után a sejttörmeléket centrifugálással ülepítjük. Ezt követõen a kettõsszálú DNS-t specifikus, szelektív kötõ mátrixon (Binding Matrix) a felülúszóból elkülönítjük, majd Wash Buffer segítségével tisztítjuk-sómentesítjük. Az így elõállított, tisztított DNS mennyiségben és minõségben egyaránt megfelel a további molekuláris alkalmazások (enzimatikus hasítás, elektroforézis, PCR, stb) követelményeinek.